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熒光顯微鏡的光路有兩種分類

點擊次數(shù):2511  更新時間:2022-09-09
  熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源,經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍(lán)光4200入)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。這樣在強(qiáng)烈的對襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認(rèn),敏感性高,主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的。熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W),它可發(fā)出各種波長的光,但每種熒光物質(zhì)都有一個產(chǎn)生強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長,所以需加用激發(fā)濾片(一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片),僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標(biāo)本上,而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后,在極短時間內(nèi)發(fā)射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專一性,一般都比激發(fā)光弱,為能觀察到專一的熒光,在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。
  熒光顯微鏡就其光路來分有兩種:
  1.透射式熒光顯微鏡:激發(fā)光源是通過聚光鏡穿過標(biāo)本材料來激發(fā)熒光的。常用暗視野集光器,也可用普通集光器,調(diào)節(jié)反光鏡使激發(fā)光轉(zhuǎn)射和旁射到標(biāo)本上.這是比較舊式的熒光顯微鏡。其優(yōu)點是低倍鏡時熒光強(qiáng),而缺點是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱.所以對觀察較大的標(biāo)本材料較好。
  2.落射式熒光顯微鏡這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡,與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器,它與光鈾呈45。角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進(jìn)入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開,殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數(shù)愈大熒光愈強(qiáng)。
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