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分析熒光顯微鏡的標(biāo)本制作要求

點(diǎn)擊次數(shù):2400  更新時(shí)間:2021-03-22
  熒光顯微鏡(Fluorescencemicroscope):熒光顯微鏡是以紫外線為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。
  熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對(duì)這類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
  一般情況下,單獨(dú)使用熒光顯微鏡即可以達(dá)到我們想要的成像效果,但在某些情況下,比如說(shuō)當(dāng)熒光比較微弱的情況下,僅僅通過(guò)熒光顯微鏡并不能達(dá)到理想的拍攝效果,或者我們希望可以將拍攝的熒光圖片上傳的電腦生面預(yù)覽,修改甚至發(fā)表學(xué)術(shù)論文,這時(shí)候沒(méi)有熒光顯微鏡CCD是不能達(dá)到要求的。
  熒光顯微鏡的標(biāo)本制作要求:
  1、載玻片
  載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚集。載玻片必須光潔,厚度均勻,無(wú)明顯自發(fā)熒光。有時(shí)需用石英玻璃載玻片。
  2、蓋玻片
  蓋玻片厚度在0.17mm左右,光潔。為了加強(qiáng)激發(fā)光,也可用于涉蓋玻片,這是一種特制的表面鍍有若干層對(duì)不同波長(zhǎng)的光起到不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)的蓋玻片,它可以使熒光順利通過(guò),而反射激發(fā)光,這種反射的激發(fā)光可激發(fā)標(biāo)本。
  3、標(biāo)本
  組織切片或其他標(biāo)本不能太厚,若太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部,而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外,細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蓋,影響判斷。
  4、封裱劑
  封裱劑常用甘油,必須無(wú)自發(fā)熒光,無(wú)色透明,熒光的亮度在pH8.5~9.5時(shí)較亮,不易很快褪去。
  5、鏡油
  一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標(biāo)本時(shí),必須使用鏡油,使用特制的無(wú)熒光鏡油,也可用上述甘油代替,液體石蠟也可用,只是折光率較低,對(duì)圖像質(zhì)量略有影響。
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